۳-۲۸-ادجوانت فروند ناقص ۱۳۹
۳-۲۹-گروه‌های تجربی و واکسیناسیون موش‌ها ۱۴۰
۳-۳۰- بررسی پاسخ های همورال ۱۴۱
۳-۳۰-۱- بررسی سطح آنتی بادی توتال در رقت های مختلف سرمی ۱۴۲
فصل چهارم: نتایج …………………………………………………………………………………………………….۱۴۴
۴-۱-پیش بینی اپی توپ سلول B 145
۴-۲- قابلیت دسترسی اپی توپ ها ۱۴۹
۴-۳-محل های N-Glycosylated 151
۴-۴-انتخاب اپی توپ ها و اتصال پپتیدها برای تولید ساختمان واکسن ۱۵۳
۴-۵-ارزشیابی توالی پروتئین ۱۵۵
۴-۶-ترجمۀ معکوس ساختمان اول ۱۵۷
۴-۷-نتایج تایید بیان پروتئین نوترکیب HPV واکسن کاندید چند اپی توپی با روش SDS-PAGE 159
۴-۸- نتایج تایید بیان پروتئین نوترکیب HPV واکسن کاندید چند اپی توپی با روش وسترن بلاتینگ ۱۶۱
۴-۹-نتایج بررسی پاسخ های ایمنی همورال ۱۶۲
۴-۹-۱- نتایج بررسی سطح آنتی‌بادی توتال اختصاصی واکسن کاندید ۱۶۲
فصل پنجم: بحث و نتیجه گیری…………………………………………………………………………………………………………………..۱۶۴
۵-۱- بحث و نتیجه گیری ۱۶۵
۵-۲-پیشنهادات و چشم اندازها ۱۶۸
References …………………………………………………………………………………………………………………………………………………169
ضمائم:
فهرست اشکال :
شکل ۲-۱٫ساختمان ویروس پاپیلوما……………………………………………………………………………………………………………………….۱۶
شکل ۲-۲٫ نقشه ژنومی در پاپیلوما ویروس……………………………………………………………………………………………………………..۱۸
شکل۲-۳٫نمایی از تکثیر پاپیلوما ویروس در ارتباط با عملکرد پروتئین های غیرساختاری……………………………………………..۱۸
شکل۲-۴٫ مواردی از عفونت پاپیلوما ویروس ها……………………………………………………………………………………………………..۳۰
شکل ۲-۵٫ مراحل اصلی پاپیلوماویروس و محل آنها در اپی تلیوم اسکوآموس…………………………………………………………….۴۱
شکل ۲-۶٫ ساختار شماتیک و توالی ژنی ناحیه بیانی pET-28a(+)…………………………………………………………………………..99
شکل۴-۱٫ نمایش انتخاب اپی توپ ها با میزان بالای قابلیت دسترسی به حلال ، در اینجا ساختمان های پروتئین L1 از سروتایپ های HPV 11, 16, 18, 31, 45 نشان داده شده اند…………………………………………………………………………………۱۵۱
شکل۴-۲٫طراحی اولیه ساختار اپی توپ های منتخب ، E1 تا E10 برای پروتئین L1 و E11 تا E20 برای L2 طراحی شدند………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..۱۵۵
شکل ۴-۳٫ آنالیز آنتی ژنی سیتی ساختمان توسط برنامه پروتئان آنالیز ،. این نتایج نشان داد که قسمت های اصلی ساختار پروتئنی جدید خصوصیات هیدروفیلیک دارد، بنابراین توان آنتی ژنیک را دارد……………………………………………………………۱۵۷
شکل۴-۴٫ توالی ترجمه شده معکوس برای بهینه سازی کدون و کدون نادر برای افزایش سطح بیان ژن و انحلال پذیری پروتئین ارزشیابی شد. به این منظور OPTIMIZER و سرورهای GenScript با هم بکار برده شدند…………………..۱۵۸
ششکل ۴-۵٫ نتایج ترجمه معکوس و بهینه سازی …………………………………………………………………………………………………۱۵۹
شکل ۴-۶٫نتایج تایید بیان پروتئین نوترکیب HPV واکسن کاندید چند اپی توپی و مشاهده باند در محدوده ۴۵ کیلو دالتون……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….۱۶۰
شکل۴-۷٫ pET28a(+)/HPV، SDS-PAGE قبل و بعد از تخلیص پروتئین ، نتیجه تخلیص به صورت تک باند و در محدوده ۴۵KD است………………………………………………………………………………………………………………………………………….۱۶۰
شکل۴-۸٫ نتایج Western Blot و SDS-PAGE ، نتیجه در محدوده ۴۵KD است……………………………………………..۱۶۱
شکل۴-۹٫ SDS-PAGE بعد از تخلیص انبوه پروتئین ، نتیجه به صورت تک باند و در محدوده ۴۵KD است…………..۱۶۲
فهرست جداول:
جدول ۲-۱٫ خصویات واکسن چهار ظرفیتی و دوظرفیتی HPV ……………………………………………………………………………….53
جدول ۲-۲٫واکسن های پیشگیری کننده در حال توسعه……………………………………………………………………………………………۶۱
جدول۲-۳٫واکسن های درمانی HPV درحال توسعه………………………………………………………………………………………………..۶۲
ﺟﺪول۲-۴٫ﭘﺎﯾﮕﺎه داده اپی توپ ها و ﺳﺎﺧﺘﺎرهای آﻧﺘﯽ ﺑﺎدی ﺑﺮای ﺳﻠﻮل B ﻣﺨﺘﻠﻒ ……………………………………………………..۷۲
ﺟﺪول ۲-۵٫ ﺗﻌﺪادی از اﺑﺰارهای ﻣﻮﺟﻮد جهتﭘﯿﺸﮕﻮﯾﯽ اپی توپ هایﺳﻠﻮل B ………………………………………………………….75
ﺟﺪول ۲- ۶ . ﻣﻨﺎﺑﻊ ﻣﻮﺟﻮد جهتﭘﯿﺸﮕﻮﯾﯽ اپی توپ هایﺳﻠﻮلB ……………………………………………………………………………80
جدول۳-۱٫ سکانس های استفاده شده برای طراحی ساختار کاندید یونیورسال واکسن HPV……………………………………..105
جدول۳-۲٫گروه بندی موش های مورد مطالعه………………………………………………………………………………………………………۱۴۱
جدول ۴-۱٫ پیش بینی اپی توپ سروتیپ های HPV 11.16.18, 31, 45 با بهره گرفتن از سرور BCPREDS……………….149
جدول ۴-۲٫فهرست نتایج مدل سازی همولوژی برای پروتئین های L1 از HPV نوع های ۱۱، ۱۶، ۱۸، ۳۱ و ۴۵٫٫٫٫٫٫٫٫٫٫٫۱۵۰
جدول۴-۳٫ امتیاز و محدوده آسپاراژین در توالی اپی توپ ها را نشان می دهد…………………………………………………………۱۵۳
جدول۴-۴٫ ۲۰ اپی توپ مناسب انتخاب شده از پروتئین های L1 و L2 ………………………………………………………………154
جدول ۴-۵٫ نتایج طراحی پروتئین و محاسبه پارامترهای مربوطه……………………………………………………………………………..۱۵۶
فهرست نمودار ها :
