در این فرایند ماده، منجمد شده و سپس فشار احاطه کننده کاهش می یابد تا به آب منجمد موجود در ماده، اجازه تصعید مستقیم از حالت جامد به حالت گاز داده شود(۶۰).
برای انجام آزمایشات این طرح، طبق پروتکل شرکت سازنده کیت آزمایش گلوتاتیون

( (Cayman Chemical Company به روش اسپکتروفتومتری عمل شد(۶۱). در این آزمایش از گلوتاتیون ردوکتاز برای تعیین GSH (فرم احیاء گلوتاتیون) استفاده می شد. گروه سولفیدریل GSH با ۵ و ۵- دی تیو- بیس-۲- نیتروبنزوئیک اسید (DTNB) واکنش داده و ماده زرد رنگ ۵- تیو- ۲- نیتروبنزوئیک اسید (TNB) را تولید می کند. دی سولفید مخلوط GSTNB (بین GSH و TNB) که به صورت همزمان تولید می شود، به وسیله گلوتاتیون روکتاز احیا شده تا چرخه مجدد GSH را برقرار نموده و TNB بیشتری تولید کند. میزان تولید TNB مستقیمأ به این واکنش چرخه مجدد بستگی دارد که در واقع باید گفت به غلظت GSH در نمونه بستگی دارد. اندازه گیری میزان جذب TNB در طول موج ۴۰۵ تا ۴۱۴ نانومتر، تخمین دقیق GSH در نمونه را فراهم می کند. GSH به آسانی به دایمر دی سولفید GSSG (فرم اکسید گلوتاتیون) اکسیده می شود. GSSG طی احیای هیدروپراکسیدها توسط گلوتاتیون پراکسیداز تولید می شود. GSSG توسط گلوتاتیون رودکتاز به GSH احیا می شود، یعنی همان فرمی که عمدتأ در سیستم های بیولوژیک وجود دارد. از آنجایی که گلوتاتیون رودکتاز در آزمایش Cayman Chemical Company مورد استفاده قرار می گیرد، هم GSH و هم GSSG اندازه گیری می شود.
چرخه ی GSH:
برای اندازه گیری تعادل اکسیدان – آنتی اکسیدان، باید مراحل زیر طبق پروتکل شرکت سازنده کیت آزمایش آنتی اکسیدان (Cayman Chemical Company) روی سرم های دپروتئینه و لیوفیلیزه شده انجام می شد:
۱) درون هر چاهک ( محل نمونه ) ۱۰ میکرولیتر از ماده مت میوگلوبین و ۱۵۰ میکرولیتر ماده رنگزا (کروموژن) ریخته شود.
۲) برای شروع واکنش میکرولیتر هیدروژن پراکساید به تمام چاهک ها اضافه شود.
۳) پلیت با برچسب پوشیده شده و به مدت ۵ دقیقه در دمای اتاق انکوبه شود.
برچسب برداشته شده و میزان جذب نوری نمونه ها در طول موج ۴۵۰ نانومتر در دستگاه plate reader خوانده شود.
تصویر ۲-۱: کیت گلوتاتیونGlutathione Assay Kit (Cayman Chemical Company)
تصویر ۲-۲: کیت آنتی اکسیدان (Antioxidant Assay Kit (Cayman Chemical Company
تصویر ۲-۳: پلیت آماده شده قبل از قرار گرفتن در دستگاه plate reader
تصویر ۲-۴: پلیت آماده شده در دستگاه plate reader
تصویر ۲-۵: نمونه ای از قرائت جذب نوری توسط دستگاه plate reader
اطلاعات پس از جمع آوری وارد نرم افزار SPSS نسخه ۱۶ شده و آنالیز توصیفی با بهره گرفتن از جداول و نمودارها و آنالیز تحلیلی با بهره گرفتن از تست مقایسه دو میانگین مناسب انجام گرفت.
معیارهای ورود
بیماران مبتلا به کارسینوم سلول سنگفرشی سر و گردن مراجعه کننده به بیمارستان امید مشهد از آبان ماه ۱۳۹۱ تا اردیبهشت ماه ۱۳۹۲ که بیماری آنها از طریق هستیوپاتولوژی ثابت شده و هنوز هیچ درمانی دریافت نکرده بودند و گروه کنترل از افراد سالم داوطلب مراجعه کننده به سازمان انتقال خون مشهد در اردیبهشت ماه ۱۳۹۲ که آگاهانه حاضر به شرکت در مطالعه بودند( هر دو گروه سالم و بیمار) انتخاب شدند.
معیارهای خروج
سوء مصرف روزانه الکل در زمان انجام مطالعه(۶۲)
عملکرد کبدی یا کلیوی مختل( در صورت وجود علائم یا سابقه مشکوک بیماری کبدی یا کلیوی در تاریخچه، از مطالعه خارج می شوند) (۶۲).
عدم رضایت از شرکت در مطالعه(۶۲)
وجو هر گونه ضایعه دهانی در گروه کنترل در زمان انجام مطالعه(۶۲)
شیوه گردآوری اطلاعات
اطلاعات به روش میدانی و آزمایشگاهی گردآوری شدند.
ابزار گردآوری اطلاعات
اطلاعات با بهره گرفتن از ابزارهای مشاهده و چک لیست گردآوری شدند.
جدول متغیرها